基質(zhì)膠成瘤與基底膜間的相互作用是調(diào)控細(xì)胞素膠可認(rèn)為是一種可溶性的基底膜基質(zhì)。主要成分包括:層黏連蛋白、膠原IV等,同時含TGF-β成纖維細(xì)胞生長因子、組織纖維酶原活化因子以及其它在EHS腫瘤中自然表達(dá)的生長因子等?;|(zhì)膠用于制備各種要求的基底膜基質(zhì),用于細(xì)胞信號研究,諸如:鼠腎干細(xì)胞形成腎小管過程中生長因子作用研究,鼠乳腺上皮干細(xì)胞的基因表達(dá)研究,transwell的腫瘤侵襲力實(shí)驗(yàn)等。
下面我們一起去看看基質(zhì)膠成瘤實(shí)驗(yàn)需要準(zhǔn)備的材料和實(shí)驗(yàn)步驟:
一、實(shí)驗(yàn)材料
細(xì)胞:B16-F10
培養(yǎng)基:含10%FBS的*培養(yǎng)基
耗材:預(yù)冷槍頭、預(yù)冷離心管
其他:胰酶,PBS,Matrigengel(ABW貨號:批次a和批次b兩個批次)
二、實(shí)驗(yàn)步驟
A.準(zhǔn)備基質(zhì)膠
1.4℃解凍Matrigengel,實(shí)驗(yàn)前轉(zhuǎn)移到冰盒中。(注意:同樣要準(zhǔn)備一些4℃預(yù)冷的槍頭用于吸取Matrigengel)
B.制作細(xì)胞懸液
取對數(shù)生長期的細(xì)胞,經(jīng)消化、離心、計數(shù)后,用無血清培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液。分別按1:3和1:6的比例稀釋C品牌、批次a和批次b三種基質(zhì)膠,并最終調(diào)整細(xì)胞密度至1×107個/mL。
C.皮下接種細(xì)胞
1.選取6-8周C57BL/6的雌性小鼠18只,每組3只。
2.分別在小鼠后背左右兩側(cè)腋下接種1×106個細(xì)胞。
3.在SPF級屏障環(huán)境的條件下飼養(yǎng)14天。
D.結(jié)果統(tǒng)計
14天后取出腫瘤,稱取重量。