操作方法：

　　一、類器官培養(yǎng)（操作所需時間為1小時）

　　1、將基質(zhì)膠于4°C冰箱里的冰上過夜解凍。

　　2、將24孔板放置于培養(yǎng)箱預(yù)熱。

　　3、用預(yù)冷的槍頭將解凍的基質(zhì)膠進(jìn)行分裝。

　　4、準(zhǔn)備病人或者動物組織（或者類器官）來源的，細(xì)胞總數(shù)為1X105的單細(xì)胞懸液。300g離心5min。

　　5、取50µL的OrganoGel基質(zhì)膠與離心所得的細(xì)胞進(jìn)行混勻。

　　6、取出預(yù)熱的24孔板，立即將基質(zhì)膠與細(xì)胞的混合物滴加在孔板里，立即將24孔板放入培養(yǎng)箱。

　　7、約10min后，基質(zhì)膠凝固后，向孔板里加入500µL類器官培養(yǎng)基，放于培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

　　

　　二、腫瘤類器官藥敏實驗（操作所需時間為2小時）

　　1、將擴(kuò)增好足夠量的腫瘤類器官（實驗組）以及正常類器官（對照組）用4°C預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行重懸，緩慢機械吹打，促進(jìn)膠液化溶解，并保持類器官結(jié)構(gòu)完整（可用于懸浮培養(yǎng)于有5%基質(zhì)膠溶液的基質(zhì)膠表面）（Guillenetal.2022）?；蛘咄ㄟ^TryplE酶消化獲得單細(xì)胞懸液。

　　2、離心收集類器官細(xì)胞，并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

　　3、加入OrganoGel基質(zhì)膠原液，與細(xì)胞進(jìn)行混勻。

　　4、將細(xì)胞與膠的混合物，通過排槍加入37°C預(yù)熱過的96孔板，或者384孔板，立即將孔板放入培養(yǎng)箱。

　　5、大約10min后，OrganoGel基質(zhì)膠將凝固，加入相應(yīng)體積的類器官培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。

　　6、類器官形成后（如果是機械吹打，類器官將在傳代24h后就會形成；如果是酶消化，類器官會在3-5天后形成），每個孔分別加入含有PI染料以及不同種類、不同濃度的待篩選的抗腫瘤藥物。

　　7、用高內(nèi)涵顯微鏡上進(jìn)行活細(xì)胞成像，測定腫瘤類器官對各種藥物的敏感性。