matrigel基質(zhì)膠從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質(zhì),其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、肝素糖蛋白,還包含生長因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。在室溫條件下,聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì),模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能,有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化,以及對細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)研究。
產(chǎn)品特性:
Matrigel基質(zhì)會(huì)有色差變化(淡黃色到深紅色),是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2作用引起的,但是與5%CO2平衡后色差即會(huì)減少。凍融后,輕輕搖晃試劑瓶使Matrigel分散均勻。所有操作均需在無菌環(huán)境下進(jìn)行,試劑瓶瓶蓋可用70%乙醇擦拭,并自然干燥。應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證Matrigel呈勻漿狀。細(xì)胞可在0.5mm厚度的Matrigel基質(zhì)層表面生長,也可在1mm厚度的Matrigel三維基質(zhì)內(nèi)生長。過度稀釋的Matrigel會(huì)形成非膠質(zhì)的蛋白層,可以用于細(xì)胞貼壁,但不能用于細(xì)胞的分化研究。
matrigel基質(zhì)膠的使用方法:
特別注意:基質(zhì)膠在22-35℃能夠快速成膠。為了保證Matrixgel基質(zhì)的成膠性能與穩(wěn)定性,最終稀釋濃度不應(yīng)低于3mg/ml(液的濃度因批次不同有差異)??捎脽o血清培養(yǎng)基來稀釋Matrixgel,稀釋后需要立即使用。
A.薄膠制備方法
1)融化后,用預(yù)冷的槍頭混勻Matrixgel基質(zhì)。
2)將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上,按50μL/cm2生長面積的濃度加入Matrixgel基質(zhì)。
3)在37℃放置30分鐘,此時(shí)平板即可使用。
B.厚膠制備方法
1)融化后,用預(yù)冷的槍頭混勻Matrixgel基質(zhì)。
2)將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上,將培養(yǎng)的細(xì)胞與Matrixgel基質(zhì)混合,用遇冷的槍頭使細(xì)胞懸浮均勻。按照150-200μL/c的濃度加入Matrixgel基質(zhì)。
3)在37℃放置30分鐘,此時(shí)即可加入細(xì)胞培養(yǎng)液。細(xì)胞也可生長在此厚膠的上層。
C.薄層包被方法
1)融化后,用預(yù)冷的槍頭混勻Matrixgel基質(zhì)。
2)采用無血清培養(yǎng)基稀釋Matrixgel基質(zhì)到需要的濃度。建議根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)做個(gè)梯度實(shí)驗(yàn),從而確定最佳的包被濃度。
3)將稀釋的Matrixgel基質(zhì)加入需要包被的培養(yǎng)器皿中,包被量至少覆蓋細(xì)胞的所有生長表面。室溫下孵育1小時(shí)。
4)去除未凝固結(jié)合的Matrixgel基質(zhì),用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。此時(shí)平板即可使用。