matrigel基質(zhì)膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質(zhì),其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白,還包含生長因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。它會有色差變化(淡黃色到深紅色),是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2的作用引起的,但是與5%CO2平衡后色差即會減少。
1、基質(zhì)膠凍融操作:
收貨后,若不立刻使用基質(zhì)膠,應(yīng)馬上將仍然是冷凍固態(tài)的基質(zhì)膠放進(jìn)-20℃冰箱保存。使用前須先將基質(zhì)膠凍融。
2、凍融:
將matrigel基質(zhì)膠埋于鋪滿碎冰的冰盒中,然后將整冰盒放入4℃冰箱stayovernight溶解。(普通濃度的基質(zhì)膠,溶解時間1-2天;高濃度基質(zhì)膠溶解時間3-7天)。
3、分裝:
溶解后的須分裝保存,以避免反復(fù)凍融。液態(tài)基質(zhì)膠,會在10℃以上快速成膠(特別是高濃度基質(zhì)膠),因此,分裝時,接觸到基質(zhì)膠的耗材必須預(yù)冷(如移液管、吸頭、EP管等),并且整個實(shí)驗(yàn)必須無菌、冰上操作。(高濃度的基質(zhì)膠比較粘稠,用移液器不好吸取,可以使用去掉針頭的預(yù)冷注射器吸取。)
4、保存:
分裝后的基質(zhì)膠在冰上應(yīng)仍然呈現(xiàn)液態(tài),此時將基質(zhì)膠放進(jìn)-20℃保存即可。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時,取出分裝好的小管,4℃凍融。若分裝好后基質(zhì)膠已經(jīng)凝固,說明分裝操作不能很好地保持低溫,導(dǎo)致基質(zhì)膠已經(jīng)成膠,不適宜使用。
5、普通濃度基質(zhì)膠操作:
細(xì)胞可在0.5mm厚度的基質(zhì)膠表面生長,可以在1mm厚度的三維基質(zhì)內(nèi)生長。過度稀釋的基質(zhì)膠會形成非膠質(zhì)的蛋白層,可以用于細(xì)胞貼壁,但不能用于細(xì)胞的研究分化。為保證基質(zhì)膠的成膠性能與穩(wěn)定,稀釋濃度不應(yīng)低于1:3,可用預(yù)冷無血清培養(yǎng)基稀釋,成膠后立即使用。